1. 적용범위
화장품, 피부외용제 및 여기에 사용되는 기제, 첨가약제, 색제, 향료 등의 피부 1차 자극성 테스트에 적용한다.
2. 목적
이 테스트 방법은 동물피부에 대한 1차 자극성을 평가하는 것을 목적으로 한다.
3. 시료
5.0g 또는 5.0ml의 시료를 필요로 한다.
4. 실시법
(1) 실험에는 체중 2.3kg -2.8kg의 흰 토끼(이하 토끼라 한다)를 사용한다. (최저 2.0kg, 최고 3.0kg을 넘지 않는 것)
(2) 먼저 전기 세발기로 등의 털을 깍은 8마리의 토끼를 4마리씩 2군으로 나누어 1군은 그대로 (intact skin), 다른 1군은 시험해당 부위에 굵힌 상처를 만들어 (Abraded skin) 고정기 (HZL형)에 고정한다.
(3) 긁힌 상처는 주사침을 사용하여 적용 국소에 종횡으로 약 2cm 긁어서 그물형 상처를 만든다. 그 상처는 표면 각층에 멎으며 진피에 도달하는 것은 아니다. (출혈이 나지 않는 정도)
(4) 시료를 액체는 0.3ml, 고체는 0.3g 을 취하며 필요한 경우는 적당한 용매에 녹여 용액으로 하여 직경 2.5cm의 Gauze를 붙인 동물 테스트용 반창고를 사용하여 피부에 첩포한다.
(5) 24시간 후에 Gauze를 제거하고 1시간후의 피부반응을 판정기준에 따라 홍반과 부종의 정도를 기입표에 기입한다.
다음에 시료를 Gauze 혹은 tissue paper로 씻어내고 동물을 고정기에서 풀어준다.
(6) 2번째의 판정은 48시간 후에 행한다. (이 값은 참고치로 한다)
(7) 72시간 후에 다시 판정을 하며 기입표에 기입한다.
(8) Intact skin 및 Abraded skin의 홍반 및 부종의 각각 24시간, 72시간값을 합하고 양자를 더하여 평균치를 구한다.
5. 판정
피부반응의 판정은 충분히 밝은 장소에서 다음의 판정기준에 따라 육안으로 행한다.
판정기준
(1) 홍반 및 가피 형성
| 홍반을 전혀 확인할 수 없는 것 |
0 |
| 약간의 홍반이 확인되는 것 |
1 |
| 명확히 홍반이 확인되는 것 |
2 |
| 심한 홍반이 확인되는 것 |
3 |
| 심한 홍반과 약간의 가피가 확인되는 것 |
4 |
(2) 부종 형성
| 부종을 확인할 수 없을 때 |
0 |
| 아주 약간의 부종을 확인할 수 있는 것 |
1 |
| 약간의 부종을 확인할 수 있는 것 |
2 |
중간정도의 부종을 확인할 수 있는 것
(대개 1mm 정도) |
3 |
심한 부종을 확인할 수 있는 것
(1mm 이상 및 첩포 범위 이상으로 생긴 것) |
4 |
시료의 평가
| 평 균 치 |
평 가 |
| 2이하 |
약간의 자극성이거나 거의 자극성이 없다 |
| 2.1 - 5.0 |
중간정도의 자극성 |
| 5이상 |
심한 자극성 |
판정에 조직 소견을 병용하기도 한다. |
